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酶底物法培养基检测大肠菌群的具体步骤

发布时间:2021-07-20   点击次数:63次
  水中大肠菌群的检测是人类生活饮用水安全的保障,能有效预防人体被大肠菌群感染。我国早前检测水质大肠菌群采用的方法是平皿计数法,此方法操作较为复杂,实验人员也需要有较高的技术素养,普及实施较难。酶底物法培养基操作简便快捷,时间周期短,数据准确,不需要有严格的实验条件即可进行,对操作人员要求也不高,下面就来介绍一下酶底物法检测大肠菌群的具体步骤。
  酶底物法培养基是在选择性培养基上产生β-半乳糖苷酶(β-D-galactosidase)的细菌群组,其能分解色原底物释放出色原体,使培养基呈颜色变化,以此来检测水中的大肠菌群。当试剂加入含有总大肠菌群细菌组的水样,目标细菌在含有固定底物的培养基中繁殖,大肠菌群细菌组产生的特异性生物酶β-半乳糖苷酶能分解培养基中的固定色原底物ONPG,产生特征性黄色荧光,同时水样中大肠埃希氏菌产生特异性B-葡萄糖苷酸酶能分解培养基中的固定荧光底物MUG,产生特征性蓝色荧光,以此定性检测水中大肠菌群和大肠埃希氏菌。
  当水样中少数非目标细菌的生物酶试图和ONPG、MUG反应并干扰检测结果时,培养基中特殊配方的基质会抑制其反应过程,控制假阳性的产生。同时,这些特殊培养基质可以有效促使目标细菌的生物酶和固定底物反应,所以假阴性发生率比传统方法更低。
  酶底物法培养基仪器:培养箱(36±1℃)、高压蒸汽灭菌器、定量盘(51孔和97孔)、立科程控定量封口机、试管、稀释瓶、移液管、量筒。
 
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